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疏水層析中的蛋白洗脫
疏水層析中的蛋白洗脫
2022-01-29
蛋白質(zhì)結(jié)合于填料之后，必須再將目標蛋白質(zhì)洗脫，并收集層析柱柱后的流出液。多數(shù)情況下，洗脫過程用于將不需要的蛋白質(zhì)從目標蛋白質(zhì)中分離或者去除。不需要的蛋白質(zhì)可能與填料結(jié)合的不是那么緊密，因而會先于目標蛋白質(zhì)被洗脫。另外一些情況下，不需要的蛋白質(zhì)會與填料結(jié)合更加緊密，并會在目標蛋白被洗脫之后仍與填料結(jié)合。這種情況通常發(fā)生在疏水層析法（HIC）分離蛋白質(zhì)多聚體時，目標蛋白多聚體與填料的結(jié)合比單體與填料的結(jié)合更加緊密。在洗脫過程中，流出液組分可能含有高純度產(chǎn)品，但在其之前或之后也會含有大量的不需要的蛋白質(zhì)雜質(zhì)。洗脫過程（梯度洗脫）如圖所示，該圖說明用HIC分離純化時，在洗脫步驟中，應(yīng)將柱后流出液進行等份收集，這樣才可以獲得適宜純度的產(chǎn)品。
洗脫過程可采用等度或梯度的方式進行。4種更常見的洗脫結(jié)合蛋白質(zhì)的方法如下：
1、降低鹽濃度（相對于結(jié)合條件） 鹽濃度的降低會相應(yīng)地減弱蛋白質(zhì)和配基間的疏水作用，進而蛋白質(zhì)被解吸附并從層析柱上洗脫下來。 2、加入有機溶劑 有機溶劑（如乙烯或丙二醇）的加入可以改變?nèi)芤旱臉O性，從而可以干擾疏水作用。 3、提供鹽濃度（采用離液鹽） 離液鹽的加入可以干擾疏水作用。 4、加入去污劑 去污劑可以用做蛋白質(zhì)置換劑，主要用于HIC純化膜蛋白。 在洗脫步驟中，將蛋白質(zhì)從HIC填料上洗脫的更常用方法是降低鹽濃度。用HIC純化新的蛋白質(zhì)組分時，同樣首先采用該方法。上述其他方法的缺點在于，需要額外加入物質(zhì)，而這些物質(zhì)可能影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。但是，洗脫與填料結(jié)合比較緊密的蛋白質(zhì)時，還是需要這些試劑的。 以下是月旭科技現(xiàn)有的HIC填料：
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