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反相離子對(duì)色譜法建立的注意事項(xiàng)(四)

2022-06-23

大家看過之前的文章后,對(duì)反相離子對(duì)色譜法已經(jīng)有很清晰的認(rèn)識(shí)了,今天小編為大家分享一個(gè)實(shí)際案例:

甲酰胺等6種物質(zhì)的分離

微信截圖_20220623113247.png

初始條件

色譜柱:Ultimate? LP-C18(4.6×250mm,5μm)。

流動(dòng)相:0.1%七氟丁酸溶液/乙腈;

檢測波長:210nm;

柱溫:30℃;

流速:1mL/min;

進(jìn)樣量:10μL。

色譜圖

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討論:

甲酰肼與4-氨基三氮唑合并,3-氨基三氮唑峰前有倒峰干擾,三氮唑峰型不好,甲酰胺與二甲酰肼分離度未基線分離,增加離子對(duì)試劑濃度

流動(dòng)相:0.3%七氟丁酸溶液/乙腈

色譜圖

微信截圖_20220623113300.png

討論:

增加離子對(duì)試劑濃度分離效果和基線都得到很好的改善,但約9分鐘處有倒峰,甲酰胺與二甲酰肼分離度未基線分離,增加離子對(duì)試劑中碳原子的數(shù)量

流動(dòng)相:10mmol/L KH2PO4(含1g/L辛烷磺酸鈉,pH1.6)/乙腈=85/15 

色譜圖

微信截圖_20220623113307.png

討論:

改用辛烷磺酸鈉以后無改善,改變離子對(duì)試劑種類

流動(dòng)相:10mmol/L KH2PO4(含2g/L己烷磺酸鈉,pH1.5)/乙腈=90/10

色譜圖

微信截圖_20220623113317.png

討論:

di一,二個(gè)峰分離良好,其他物質(zhì)需要改善,調(diào)整有機(jī)相的比例。

流動(dòng)相:10mmol/L KH2PO4(含2g/L己烷磺酸鈉,pH1.5)/乙腈=95/5

色譜圖

微信截圖_20220623113323.png

測試結(jié)果:

保留及分離情況均良好,分離完全,三氮唑峰形能滿足峰面積定量要求。

討論:

在分離甲酰胺等6個(gè)物質(zhì)時(shí),這幾個(gè)均為極性較大,反相色譜上保留弱,要達(dá)到六個(gè)成分的分離,首先需增加其保留,再根據(jù)情況,調(diào)整離子對(duì)試劑的量,pH值,有機(jī)相種類與濃度以達(dá)到分離,在實(shí)驗(yàn)中選擇了耐受強(qiáng)酸條件的Ultimate? LP-C8(pH耐受范圍0.5-8)柱,通過調(diào)整離子對(duì)試劑的種類,濃度,有機(jī)相的比例,使得各物質(zhì)得到良好的分離,滿足日常檢測需求。

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