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高效液相色譜日常維護(hù)要點(diǎn)-過濾

2022-06-24

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哈嘍哈嘍小編又來了,上期在高效液相色譜日常維護(hù)要點(diǎn)-脫氣中具體給大家介紹了為什么需要脫氣的具體原因和脫氣一些常規(guī)方法,那么今天就帶大家具體了解下高效液相色譜必不可少的步驟—過濾。

任何顆粒物進(jìn)入HPLC系統(tǒng)后都會在柱子入口端被篩板擋住,更后的結(jié)果是將柱子堵塞,一般表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形,從而導(dǎo)致檢測不能正常進(jìn)行。因此,要采取各種預(yù)防措施,包括操作步驟和商品儀器自身的各種過濾設(shè)計,努力防止或減少顆粒物進(jìn)入HPLC系統(tǒng)中,從而延長儀器和色譜柱的使用壽命,并提高數(shù)據(jù)的可靠性。

小編做了簡單總結(jié),一般在HPLC系統(tǒng)中,顆粒物的主要來源有三個途徑:被測樣品、流動相和儀器系統(tǒng)部件的磨損物

顆粒物的主要來源

01 被測樣品

液相系統(tǒng)中的di一類顆粒物來源是被測樣品。有過實(shí)驗經(jīng)驗的小伙伴都知道,在將樣品上機(jī)之前,所有樣品都先通過一個0.45μm針筒式過濾器過濾。這是一個有效除去被測樣品中顆粒物的方法。但是這個過程也有一點(diǎn)美中不足就是:在使用針筒式過濾器就不可能1OO%得到通過過濾器的被測樣品,總會有或多或少的丟失。

02 流動相

液相系統(tǒng)中的第二類顆粒物來源是流動相。如果HPLC系統(tǒng)中存在顆粒雜質(zhì),那么系統(tǒng)中的幾個部件都不可以良好地運(yùn)行。這些部件包括比例閥、止回閥、管路和色譜柱的濾頭。由于這個原因,使用沒有顆粒雜質(zhì)的流動相非常重要。如果不是使用HPLC級別的溶劑作為流動相。那么流動相的組成成分必須在加入儲液瓶之前經(jīng)過過濾。對于那些受監(jiān)管的工作環(huán)境,應(yīng)該有一份標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)的書寫文檔,說明什么時候有必要對流動相進(jìn)行額外過濾,什么時候不必要。

使用預(yù)先過濾過的溶劑是避免雜質(zhì)顆粒進(jìn)入流動相的簡單的方法。市場上銷售的HPLC級別的溶劑在包裝前預(yù)先經(jīng)過亞微粒(通常為0.2μm)過濾器過濾。實(shí)驗室里(比如Milli-Q水凈化處理)準(zhǔn)備的HPLC級別的水后一步要通過0.2μm的過濾器過濾。如果在流動相里只用HPLC級別的液體,一般共識的就是不需要在使用之前操作任何額外的過濾程序。然而,假如使用的是非HPLC級別的試劑或者在流動相里加入了任何固體的試劑(比如磷酸鹽緩沖劑),那么更明智的做法就是在使用之前過濾所有的流動相混合物。

流動相可以很容易地通過流動相真空抽濾裝置來過濾。一般步驟是首先將微孔濾膜(通??讖?.5μm)放置在漏斗和真空燒瓶之間的支撐濾頭上。然后把溶劑倒入漏斗然后在真空泵的協(xié)助之下,收集(過濾后的)溶劑。抽濾器生產(chǎn)商為不同的過濾應(yīng)用提供了合適的過濾器材料的選擇指導(dǎo)。比如,PTFE微孔濾膜具有疏水性,適用于純有機(jī)溶劑,比如甲醇或者乙腈,但因為非極性很強(qiáng)因此不適用于快速過濾水。真空燒瓶之間的密封材料是用磨砂玻璃制成的,或者是一種“惰性”的瓶塞(比如硅酮),但是好還是不要讓流動相和瓶塞接觸。

03 儀器系統(tǒng)部件的磨損物

后,在HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一類主要來源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。

di一種建議認(rèn)為:在一般實(shí)驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個月到一年,因此建議半年或一年更換這些密封墊。

第二種建議認(rèn)為:原裝密封墊的密封效果好,更換以后容易引起流動相滲漏。所以,只要不漏液就不要輕易更換密封墊。

到此為什么需要過濾的具體原因和日常過濾的具體方法,在這里就差不多介紹完了。下期小編將繼續(xù)帶領(lǐng)大家去具體了解高效液相色譜日常維護(hù)要點(diǎn)—沖洗。

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